脱盐柱原理使用方法

脱盐柱原理使用方法

脱盐柱的原理主要是基于凝胶过滤层析（也称分子筛层析），其利用不同大小的分子在通过填充材料时的不同行为来实现分离。脱盐柱内部填充了一种具有特定孔径的凝胶珠，这些凝胶珠由许多微小的孔洞组成，可以看作是“海绵”。当含有目标分子和小分子杂质的样品溶液通过脱盐柱时，大分子物质（如蛋白质、核酸等）由于体积较大，无法进入凝胶珠的孔洞内，因此它们会在凝胶珠之间的空隙中流动，最先流出柱子。而小分子物质（如盐离子、小分子染料等）则可以进入凝胶珠的孔洞中，由于需要花费更多的时间穿过这些孔洞，所以它们会较晚流出柱子。

使用方法

重力方式

准备

取下顶部的盖子并倒出柱子里的储存液。

剪开脱盐柱底部槽口处。

平衡

用平衡缓冲液填满脱盐柱并且让缓冲液完全进入柱床内，重复4次，然后丢弃流出液。平衡缓冲液成分没有要求，可以根据需要自由选择，大约需要25mL。

样品上样

最多加入2.5mL样品到脱盐柱中，如果样品体积小于2.5mL，在样品完全进入柱床后添加平衡缓冲液调节体积至2.5mL，然后丢弃流出液。

洗脱

让样品或平衡缓冲液完全进入柱床后，开始洗脱过程。洗脱可以采用重力方式，样品会在重力作用下通过柱子，通常回收率在70%到90%之间，增加样品浓度可以改善回收率。

离心方式

准备

与接头和收集管组装在一起。

平衡

用平衡缓冲液填满脱盐柱并且让缓冲液完全进入柱床内，重复4次，然后丢弃流出液。

样品上样

最多加入2.5mL样品到脱盐柱中，如果样品体积小于2.5mL，在样品完全进入柱床后添加平衡缓冲液调节体积至2.5mL，然后丢弃流出液。

洗脱

通过离心进行使用，样品不会被稀释。洗脱过程可以根据需要选择不同的洗脱缓冲液和条件。

注意事项

样品浓度：增加样品浓度可以提高回收率。

平衡缓冲液：选择合适的平衡缓冲液可以提高分离效果和回收率。

洗脱条件：选择合适的洗脱缓冲液和洗脱条件，以确保目标分子能够有效洗脱。

通过以上步骤和注意事项，可以有效地使用脱盐柱进行样品的脱盐纯化。